O princípio da extração líquida “solid supported” (SLE) é análogo à extração convencional líquido-líquido (LLE). São utilizados os mesmos solventes e misturas que não podem ser misturados com água. No entanto, uma única extração “no cartucho” é suficiente para conseguir recuperações comparáveis às do LLE. A solução da amostra é uniformemente imobilizada como uma película fina sobre uma terra de diatomáceas inerte e de poros largos. Após um período de espera de 5-10 minutos, que serve para estabelecer o equilíbrio, o eluente orgânico flui através dos poros do material de transporte e extrai os analitos para a fase orgânica. Quanto melhor o analito for solúvel em solvente orgânico e quanto pior em água, maior será o rendimento de extração.
A preparação de amostras com colunas e placas SLE BEKOlut® de 96 poços é essencialmente realizada sob pressão hidrostática (gravidade), acontecendo que um impulso inicial com vácuo ou sobrepressão pode ser bastante útil para aplicar a amostra uniformemente na coluna/placa seca ou para recuperar o máximo de solvente após a eluição. São utilizados sistemas manuais e automatizados, de vácuo ou de pressão.
A terra de diatomáceas, especialmente processada para SLE, tem um pH de 9-10 num ambiente aquoso. Isto significa que os analitos ácidos têm de ser tornados mais ácidos na amostra, ao passo que não é necessário um ajuste de pH para analitos básicos.
Outra vantagem da bioanálise: extratos sem proteínas nem fosfolípidos. Nos solventes de extração mais lipofílicos utilizados em LLE e SLE, as proteínas, os lípidos polares (fosfo-lípidos) e os sais são apenas muito pouco solúveis ou mesmo insolúveis, pelo que são em grande parte excluídos do extrato. Isto significa que os extratos resultantes não contêm proteínas e fosfolípidos interferentes.
Ao contrário da SPE, onde geralmente apenas uma alíquota da amostra é carregada na coluna SPE condicionada, na SLE o volume total da amostra é carregado no leito de cartucho seco. É portanto indispensável utilizar uma coluna com capacidade de volume suficiente. Após o equilíbrio (após aprox. 5-10 min.) faz sentido ter alguns milímetros de reserva na extremidade inferior do cartucho para que a solução aquosa da amostra não “quebre” durante a eluição, especialmente quando se utilizam eluentes contendo álcool.
O volume de amostra a adicionar está imprimido no cartucho, por exemplo, SLE 1 é adequado para se adicionar 1 ml de volume de amostra aquosa. A eluição ocorre com 2-3 vezes o volume da amostra. A tabela 1 fornece uma visão geral dos volumes máximos de amostra e eluição.
A seletividade da extração é determinada pela solubilidade dos analitos na fase orgânica. São solventes típicos: Éter dietílico, éter metilterbutílico, acetato de etilo, n-hexano, ciclohexano,tolueno, diclorometano, triclorometano.
Por exemplo, as seguintes misturas de solventes com uma pequena fração polar são utilizadas para menos analitos não polares. As misturas compostas contendo álcool não devem ser misturáveis com água.
Éter dietílico – Etanol (80:20, v/v)
Diclorometano – Isopropanol (85:15, v/v)
Para amostras puras aquosas, tais como sangue, soro, plasma, o diclorometano-isopropanol (85:15, v/v) é um solvente de eluição ideal.
Tabela 1: Volumes máximos de amostra e de eluição necessários para os produtos SLE BEKOlut®
Capacidade de volume | Volume máximo da amostra | Volume de eluição |
---|---|---|
Placas de 96 poços de 200 µl | 200 µL | 1 x 1 mL |
Placas de 96 poços de 400 µl | 400 µL | 2 x 900 µL |
Coluna de 1 ml | 1 mL | 2 x 2,5 mL |
Coluna de 2 ml | 2 mL | 2 x 5 mL |
Coluna de 5 ml | 5 mL | 3 x 8 mL |
Coluna de 10 ml | 10 mL | 2 x 20 mL |
Coluna de 20 ml | 20 mL | 2 x 40 mL |
Coluna de 50 ml | 50 mL | 2 x 60 mL |