CARACTERÍSTICAS – CORTAS Y CONCISAS
El principio de la extracción de líquidos (SLE) con soporte sólido es análogo al principio tradicional de extracción líquido-líquido (LLE). Se utilizan los mismos disolventes y mezclas de disolventes. Alcanza una única extracción en el cartucho para obtener comparaciones comparables con el LLE. En este se inmoviliza con un film delgado y parejo una solución de la muestra en tierra de diatomeas inerte y de poros grandes. Luego de un tiempo de espera de 5-10 minutos, que sirve para alcanzar un equilibrio, el eluyente orgánico fluye por los poros del material de soporte y extrae los analitos en la fase orgánica. Cuanto mejor se disuelve el analito en el disolvente orgánico y peor en agua, tanto más alta es la cuota de rendimiento de la extracción.
La preparación de la muestra con cartuchos BEKOlut® SLE y placas de 96 posiciones resulta básicamente a presión hidrostática (fuerza de gravedad), a lo cual puede ser útil darle un impulso de inicio con vacío o presión manométrica, para distribuir la muestra de forma uniforme en el/la cartucho/placa seco/-a o para recuperar el máximo de disolvente después de la elución. Allí se logra una buena aplicación con sistemas de presión o de vacío tanto manuales como automatizados.
La tierra de diatomea especialmente procesada para SLE muestra en un medio acuoso un pH de 9-10. Esto significa que en caso de analitos ácidos, a estos se le debe aumentar la acidez en la muestra, mientras que en caso de analitos base se puede prescindir de una regulación del pH.
Otra ventaja para la bioanalítica: Extractos libres de proteínas y fosfolípidos. En los disolventes de extracción más bien lipófilos utilizados en LLE y SLE, las proteínas, fosfolípidos y sales son poco hasta no solubles y por esto son excluídos en gran parte del extracto. Esto significa que los extractos resultantes están libres de proteínas y fosfolípidos que interfieren.
Contrariamente a SPE, en la que en general solo se le agrega a la columna SPE acondicionado una alícuota de la muestra, se agrega en la SLE todo el volumen de la muestra al lecho del cartucho seco. Por esto es imprescindible utilizar un cartucho de suficiente capacidad de volumen. Luego de equilibrar (aprox. 5-10 min) es conveniente, especialmente, para la aplicación de eluyentes que contienen alcohol, tener unos milímetros de reserva en el fondo del cartucho para que la solución acuosa de la muestra no forme canales con la elución.
El volumen de muestra a agregarse está impreso en el cartucho, por ej. SLE 1 es apropiado para el agregado de 1 ml de volumen de muestra acuosa. Se eluye con 2-3 veces el volumen de muestra. Una orientación de los volúmenes máximos de muestra y elución muestra la tabla 1.
La selectividad de la extracción se define por la solubilidad del analito en la fase orgánica. Disolventes típicos son: di etil éter, metil ter-butil éter, etanoato de etilo, n-hexano, ciclohexano, tolueno, cloruro de metileno, tricloruro de metilo.
Ejemplarmente se utilizan las siguientes mezclas de disolventes con una pequeña proporción polar para analitos menos apolares. Las mezclas compuestas con proporciones de alcohol no se deben mezclar con agua.
di etil éter – etanol (80:20, v/v)
cloruro de metileno – 2-propanol (85:15, v/v)
Para muestras acuosas como sangre, suero y plasma el cloruro de metileno-2-propanol (85:15, v/v) es un eluyente ideal.
Tabla 1: Volúmenes de eluyentes necesarios y volúmenes máximos de muestras para productos BEKOlut® SLE
| Capacidad de volumen | Volumen máximo de muestra | Volumen de elución |
|---|---|---|
| 200 µL 96-well Platte | 200 µL | 1 x 1 mL |
| 400 µL 96-well Platte | 400 µL | 2 x 900 µL |
| 1 mL columna | 1 mL | 2 x 2,5 mL |
| 2 mL columna | 2 mL | 2 x 5 mL |
| 5 mL columna | 5 mL | 3 x 8 mL |
| 10 mL columna | 10 mL | 2 x 20 mL |
| 20 mL columna | 20 mL | 2 x 40 mL |
| 50 mL columna | 50 mL | 2 x 60 mL |
